Solution D（Sol.D）
4M グアニジウムチオシアネート
25mM クエン酸ナトリウム
0.5% サルコシル
β-メルカプトエタノール
RNAの抽出当日にSol.D 100mLに対し、β-メルカプトエタノールを 0.72mL混合し、これを抽出に用いた。
2M 酢酸ナトリウム（pH4.0）
滅菌蒸留水飽和フェノール
クロロホルム／イソアミルアルコール（24:1）
特級イソプロピルアルコール
特級エタノール
実験に用いた器具はすべてオートクレーブし、実験時及び試薬調製時には、手袋を着用した。100mm径の培養皿で培養した細胞を4〜5mLの1×PBSで1回洗い､1.5mLのSol.Dを加えて細胞を15mL遠心チューブ（スミロン）に回収し、再びSol.D 1.5mLを加えディッシュを洗い同じ遠心チューブに回収した。それをボルテックスを用いて均一になるまで激しく撹拌した。滅菌蒸留水飽和フェノールを3mL（1容）、2M 酢酸ナトリウム (pH4.0) を0.3mL（1/10容）、クロロホルム／イソアミルアルコールを0.65mL（1/5容）を加え、激しく撹拌した。15分以上氷上に置いた後、スイングローター遠心機(R90-23; SAKUMA)で20分間、3400rpmの遠心を行った。上層を全量15mL遠心チューブに移し3mLのイソプロピルアルコールを加え、よく撹拌後、-20℃に1時間以上又は-80℃に15分間放置した。4℃で15分間、アングルローター遠心機(himac CR21; HITACHI、ローター：50F6A)で10000xgの遠心をし、デカンテーションとパスツールピペットによる水滴の除去を行い、沈澱を0.4mLのSol.Dに溶解した。これを全量1.5mLマイクロチューブに移し、エタノールを1mL加え-20℃1時間以上又は-80℃15分間放置した。4℃で15分間15000rpmで遠心し、上清をデカンテーションで除き沈殿を70%エタノールで洗った。沈澱を数分間風乾し滅菌蒸留水20〜30mLに溶解し、260nmの紫外吸収によりRNA量を定量しノーザンブロッティングに用いた。